为能更加有效地提高烟青虫室内人工饲养效率,满足试验用虫需要,在已报道的烟青虫饲养方法基础上,对烟青虫卵的收集方法及初孵幼虫转移方法加以改进。就利用人工气候箱及自主配制饲料对烟青虫进行室内人工饲养改进的具体方法细则进行介绍,探究一种适合烟青虫小空间大量饲养的方法,以期为烟青虫相关的研究提供足够供试虫体。

烟青虫[Helicoverpa assulta (Guenée)]属鳞翅目(Lepidoptera)夜蛾科(Noctuidae)铃夜蛾属(Helicoverpa),在田间主要危害辣椒和烟草,是一种重要的寡食性农业害虫。研究表明,在长江中下游各烟区每年因该虫造成的烟草产量损失达5%～10%,大发生年份可超过15%[1],危害辣椒造成的损失高达20%～30%[2]。早期由于农药的滥用,导致虫体产生抗性,近年来随着人们生活水平的提高,人们开始注重农产品的食用安全,提倡“农药零增长”,加之全球气候变暖,使得烟青虫危害加重[3,4]。为降低烟青虫的危害,亟需对其生物学特性、生态及生物药效评估、诱导剂效果评估等方面进行持续深入研究[5,6,7,8,9]。此外,烟青虫和棉铃虫[Helicoverpa armigera (Hübner)]是同属近缘姐妹种,两者可进行种间杂交,是用来研究鳞翅目昆虫遗传和子一代不育机理的理想试验材料[10,11]。随着对烟青虫和棉铃虫两者生态、毒理和遗传等研究的深入,随时需要提供大量生理状态一致的标准试虫。目前烟青虫和棉铃虫室内人工继代饲养技术已经实现,且处于不断改进之中[12],其饲养方法渐趋于低成本和高效繁虫。然而烟青虫和棉铃虫种群扩繁过程中,成虫散产虫卵的生物学特性使得卵粒收集困难,卵布上初孵幼虫转移困难等问题严重影响供试虫体的扩繁[13]。因此,笔者探究了烟青虫室内大量饲养的方法,旨在为进一步研究烟青虫和棉铃虫提供参考。
1 人工气候箱及条件设置
人工气候箱至少2台(容积:380L;型号:RXZ-380A(多段);厂家:宁波江南仪器厂),温度为(26±1) ℃,光周期为L16∶D8,相对湿度60%～80%。人工气候箱定期用75%的乙醇擦拭(紫外光照射30 min)消毒熏蒸后使用(每30 d 1次)。
2 饲养设备及用具
①收集卵:医用脱脂纱布(遵义联盟医用器材有限公司);②饲养低龄幼虫:19.2 cm×13.0 cm×7.1 cm容积为1.5 L食品保鲜塑料盒(图1A、B)、200目尼龙纱网块、84消毒液;③饲养3龄幼虫和高龄幼虫:环保连体食品原盒(型号P2-50ML)(图1C);④饲养蛹:培养皿、无菌棉花、75%乙醇;⑤饲养成虫:羽化展翅笼(图1D、E)、培养皿、含蜂蜜水的棉花球、交配杯(图1F)。
3 饲养过程
3.1 饲养器具的清洗和消毒
将培养皿、低龄幼虫饲养盒等养虫器具置于盆中,加84消毒液浸泡2 h后戴手套用试管刷刷洗干净,清水漂洗2次后倒置晾干,喷75%乙醇消毒液进一步消毒,自然风干后隔离放置干净环境中储存备用。
3.2 饲料的准备
配制步骤:饲料配方参照董钧锋等[12]的方法略作修改,分别称取麦胚、大豆粉、蔗糖、酵母粉、尼泊金、山梨酸、抗坏血酸、亚油酸(滴)、维生素C、维生素B(片)、氯化钠、琼脂、蒸馏水、烟叶等成分,各成分配比:麦胚粉40.0 g,大豆粉20.0 g,蔗糖5.0 g,酵母粉提取物12.0 g,尼泊金1.0 g,山梨酸0.4 g,亚油酸2.0 滴,抗坏血酸1.7 g,维生素C 2.0 g,维生素B 10.0 片,琼脂粉5.0 g,氯化钠0.1 g,蒸馏水300.0 mL,烟粉15.0 g。将300 mL 蒸馏水和5 g琼脂粉倒入电饭煲中加热至沸腾后加入预先称量好的麦芽粉、大豆粉、蔗糖,待煮沸10 min后保温搅拌2 min。之后加入其余组分(酵母粉、尼泊金、山梨酸、抗坏血酸、亚油酸(滴)、维生素C、维生素B(片)、氯化钠、烟粉)搅拌继续加热5 min即可(图1H)。将高温煮熟的饲料倒入饲料盒中,待其冷却后盖上盒盖,放入4 ℃冰箱备用。(部分原材料的加工,烟叶放入60 ℃的烘箱中,待其完全干燥后取出,用小型多功能粉碎机(璐枫LF-600A型)对干燥烟叶进行粉碎,制成烟粉待用;麦胚粉为小麦催芽淘洗干净后烘干粉碎而成,大豆粉为市售大豆粉。)
3.3 虫源的引入
于烟青虫发生期前往贵州省遵义市凤冈县进化镇烟草基地采集烟青虫幼虫带回实验室投喂人工饲料进行饲养(图1J)。成虫饲以25%的蜂蜜水,在人工气候箱中建立试验种群。烟青虫幼虫鉴定参照文献[14]的方法。
3.4 幼虫的饲养
烟青虫高、低龄幼虫均用上述饲料进行喂养,3龄以前用19.2 cm×13.0 cm×7.1 cm容积为1.5 L食品保鲜塑料盒进行集体饲养,每天检查饲料取食情况,并加入新鲜饲料。待虫体长至3龄大小后进行单头饲养,饲养容器为事先已进行扎孔处理的环保连体食品圆盒(型号P2-50ML),每盒一头,根据虫体生长情况酌情加入饲料,饲料2 d一换。待虫体进入高龄幼虫后,加入足量饲料块,以供其制作土室进行化蛹(图1K)。操作过程中应注意全程配戴一次性消毒手套,在更换饲料过程中,如发现虫盒内的虫感染死亡,直接将该虫盒移除,幼虫期13 d左右。高龄幼虫饲养盒为一次性用品,若以其他饲养器具代替应注重消毒。
3.5 蛹的收集和