厌氧培养箱法

厌氧培养箱是一种在无氧环境条件下完成细菌培养的专用装置。试验以上海跃进医用光学器材厂的YQX-11型厌氧培养箱完成,该法与分子生物学上常用于细菌鉴定的16S RNA法(免培养)相比较,又称为可培养法。

菌株初筛将无菌采取的盲肠液置于含无菌水和玻璃珠的三角瓶中,充分振荡溶解后取上清液以CMC-Na培养基置于厌氧培养箱中培养2~3 d(初筛)后观察菌落形态特征(颜色、形状、质地等);经革兰染色后在显微镜下观察并记录菌体形态特征,并将疑似优势菌株作为后续试验菌株。

菌株复筛将经镜检初筛出的优势菌株接种到5个装有滤纸片(已称重)的液体培养基中,37℃静置培养48 h后观察培养基上滤纸的形态变化及菌株的生长状况,并称量滤纸质量,记录结果。

菌株纯化将经复筛得到的单菌落接种于CMC-Na培养基上,置于厌氧培养箱内37℃恒温培养48 h。待平板上长出菌落后,立即挑取,并在CMC-Na平板上划线分离培养以得到单一菌落。

菌株生化鉴定将经初筛、复筛、分离、纯化得到的优势菌株,以鉴定管法进行生化鉴定,即采用细菌编码鉴定检索方法。本试验中,常规生化反应10项,将分离纯化得到的单一菌落接种到鉴定管内,37℃培养48 h后观察鉴定管变化,并记录结果。