1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 供试菌株枯草芽孢杆菌, 在实验室沙土管保藏菌种。1.1.2 培养基牛肉膏蛋白胨培养基:蛋白胨10g/L、牛肉浸膏5g/L、氯化钠5g/L, 调节pH为7.4～7.6。解磷液体培养基:蔗糖10g/L、磷酸钙10g/L、氯化钠0.3g/L、氯化钾0.3g/L、硫酸镁0.3g/L、硫酸亚铁0.03g/L、硫酸锰0.03g/L、硫酸铵0.5g/L、酵母提取物0.5g/L, pH7.2, 115℃灭菌20min。碳源培养基:将解磷培养基中的碳源分别替换成蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖, 其他成分保持不变。氮源培养基:将解磷培养基中的氮源分别替换成硫酸铵、硝酸铵、硝酸钾、硝酸钠和尿素, 其他成分保持不变。重金属离子培养基:在液体解磷培养基中分别加入Mg2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+、Mn2+金属离子, 其浓度保持一致。1.1.3 仪器设备主要有紫外分光光度计 (UV-1800上海印溪仪器仪表有限公司) 、分析天平 (FA2004上海菁海仪器有限公司) 、电子天平 (TD5002G天津天马衡基仪器有限公司) 、超净工作台 (BCM-1000苏州净化设备有限公司) 、灭菌锅 (YM100Z 100L上海三申医疗器械有限公司) 、恒温培养摇床 (HYL-B太仓市强乐实验设备有限公司) 、pH计 (E-201-C上海仪电科学仪器股份有限公司) 等。1.2 试验方法1.2.1 吸光度值与菌体浓度标准曲线收集发酵液后测定其吸光度值, 利用比浊法 (600nm) 测定[4], 然后离心称重, 得到细菌的湿重。再烘干称重得到其干重。以菌浓度为纵坐标, 吸光度为横坐标作标准曲线, 结果见图1。菌浓度标准曲线回归方程为y=0.5503x-0.1183, 回归系数R2=0.9898, 含水量约为10%。                                                                  图1 菌浓度标准曲线    下载原图

1.2.2 枯草芽孢杆菌菌体生长量测定取微量被保藏于沙土中的解磷菌到液体牛肉膏蛋白胨培养基中, 在适宜条件下培养, 通过分光光度计测定吸光度, 以1.2.1计算得出菌浓度。以时间为横坐标, 菌浓度为纵坐标绘制生长曲线, 据此确定菌株在发酵培养中的最佳接种时间。1.2.3 液体培养条件下溶磷能力测定分别吸取5mg/L磷标准缓冲液0mL、2 mL、4mL、6 mL、8 mL和10 mL于50 mL容量瓶中, 加去离子水至30 mL, 加钼锑抗试剂5 mL, 摇匀, 定容得浓度为0mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L和1.0mg/L溶液, 静置约30min后, 在700nm波长紫外分光光度计上进行显色比色, 以磷质量浓度为横坐标, 以吸光度为纵坐标绘制磷标准曲线[5], 结果如图2所示。钼锑抗磷标准曲线线性回归方程为y=0.5031x+0.0034, 通过磷标准曲线计算溶液中有效磷含量, 以确定菌株的溶磷能力。